悬浮细胞做好免疫荧光的方法Protocol和创新

根据细胞培养时是否附着在支持介质上，分为贴壁细胞和悬浮细胞。

贴壁细胞天生容易贴壁，这为后续实验提供了便利条件。

但是悬浮细胞在培养基中悬浮生长，如何像贴壁细胞一样好操作，一直是大家的梦想。

一 传统的方法：细胞准备与固定

（1）单层生长细胞：取对数生长细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液。将细胞接种到预先放置几张6×22mm盖玻片的培养瓶或培养皿中，置二氧化碳培养箱培养1-3天，待细胞接近长成单层，取出盖玻片，进入PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次，然后根据实验目的，选择适当固定剂固定细胞。常用固定剂有：95％乙醇（固定时间10-30min），丙酮（5－10min）等。

（2) 悬浮生长细胞：取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm，5min）2次，或用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片，把细胞片浸入95％乙醇或丙酮中固定。

2 将已经固定的细胞玻片放入盖片染色缸，用PBS振洗5min，取出吹干。

3 滴加适当稀释的特异性抗体，置于湿盒内，37度保温30－60min或度冰箱过夜

4 PBS振洗3次，每次5min，吹干。

5 滴加适当稀释的荧光素标记抗体，置于湿盒内，37度保温30－60min。

6 PBS振洗2次，每次5min，然后用蒸馏水振洗1次。

7 50％缓冲甘油封片。

二 痛点解决方案：Shi-Fix（靶点科技）玻片固定法

Shi-Fix（靶点科技）玻片，可以让我们像贴壁细胞一样对悬浮细胞做免疫荧光，如下是使用Shi-Fix做的实验结果。简单的四部，告别传统的自己涂片，自己甩片，自己烤片等作坊式方法。

使用靶点科技的悬浮细胞免疫荧光专用玻片，仅仅需要四步，就可以固定悬浮细胞。避免传统的用多聚赖氨酸的爬片以及有机试剂固定等方法导致的掉片，细胞固定不住，固定不稳，做到最后没有几个细胞，甚至没有细胞了。这种方法做下来简直就是开盲盒，稳定性就不用说了。花了时间，也浪费了经费，还没有实验结果。使用靶点科技的悬浮细胞免疫荧光专用固定玻片，这些问题都是过去式了。一半固定30分钟，最多不要超过一个小时，悬浮细胞就像贴壁细胞一样，固定在玻片上，记住哦，细胞还是活的，想干的啥也是可以的。