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E-Blot化学发光成像系统电子压片成像仪

人阅读 发布时间:2022-03-24 18:05

2019 年底,一项全新的 Western blot 成像技术—eBlot 接触式成像,在中国的上海医谷创新面世。这项技术完美解决了传统 Western blot 成像仪器的灵敏度不够、定量范围窄、成像时间太长以及占地面积太大的问题;相对于冷 CCD 成像技术,eBlot 接触式成像将成像灵敏度提升了 2-3 个数量级, 定量范围提升 2 个数量级, >95% 的样品成像时间缩短到 1 秒以内,且仪器的体积缩小到传统仪器的 1/10 不到。该技术一面世就受到科研人员的认可,已帮助北京大学、上海交通大学、中科院、中国CDC等众多国家学术研究单位解决了他们研究中遇到的 Western blot 成像难题。
 

 

欲了解此技术的详情,我们还需要从 Western blot 的历史和 Western blot 成像方法的历史讲起。

1981 年美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)发明了蛋白质印迹(Western blot),至今已有 40 年的时间。Western blot 作为一个经典的蛋白定量技术,被越来越多的人所使用,已成为每个分子生物学实验室所必须要做的一个实验。但是 Western blot 技术本身的发展却非常缓慢,尤其在成像检测技术方面已有 20 多年的时间没有新的突破。

Western blot 常用的几种成像方法及优劣势如下:

 成像方法 优势 劣势
直接显色法 DAB显色 1,操作简单
2,无需暗房
3,无需成像设备
4,成本低
1,灵敏度低,低丰度蛋白无法检测
2,定量范围窄,只有 1.5OD,表达差异大的蛋白无法准确定量
化学发光法 暗房压片 1,压片过程没有光损失,灵敏度高,可以实现极微弱信号的成像
2,无需购置设备
1,需要一个独立的暗房             
2,定量范围窄,只有 1.8OD,表达差异大的蛋白无法准确定量
3,需要胶片、显影液定影液等耗材                          
冷 CCD 成像 1,定量范围高,高达 4.8OD,表达量差异大的蛋白可以准确定量
2,检测灵敏度高
1,成像过程有大量的光损失,达不到压片的灵敏度,非常低丰度的蛋白检测不到  
2,需要购置冷 CCD 成像设备、维护成本极高                        
荧光法 RGB 可见荧光 1,可以实现多重检测 1,Western 膜本身的荧光背景非常高,导致成像灵敏度非常低,低丰度蛋白检测不到
2,操作过程需要在避光的环境下进行
3,荧光抗体种类不够多且成本高
4,多重检测需要做大量的实验条件优化
5,需要特殊的试剂
6,荧光成像设备成本高
近红外荧光 1,可以实现多重检测 
2,相对于可见荧光背景低
1,Western 膜本身的荧光背景导致成像灵敏度不够,低丰度蛋白检测不到   
2,操作过程需要在避光的环境下进行   
3,荧光抗体种类不够多且成本高
4,多重检测需要做大量的实验条件优化
5,需要特殊的试剂
6,近红外荧光成像设备成本非常高


在各种成像方法中,冷 CCD 化学发光成像由于具有操作简单、灵敏度高、定量范围宽等优势,成为了受欢迎的成像方法,被超过 99% 的科研人员所使用。

但是,随着科研的不断深入,科研人员反应 Western blot 也越来越难做,科学家在 Western bot 方面面临的难题具体表现在:

1. 高丰度表达的蛋白都被做完了,剩下的尽是低丰度表达的蛋白,需要更加灵敏的成像技术。

2. 容易获取的样品都被做完了,剩下的尽是不容易获取的样品,一份样品要做多个实验,也是需要更加灵敏的成像技术,且要求实验尽量要一次能做成,没有样品用来做大量的条件优化。

3. 蛋白表达差异不大的都被做掉了,剩下的尽是些蛋白表达差异非常大,需要能准确定量的成像技术。


虽然冷 CCD 化学发光成像方法有多种优势,被绝大多数人使用,但是由于其本身的技术限制,在面临超低丰度蛋白、稀有样品和表达差异巨大的样品时就显得无能为力了,这些随着科研逐步深入所带来的难题急需新的技术出现来解决。
这些技术限制包括:

1. 冷 CCD 成像仪器所用的芯片本身太小,大多只有 1 英寸或者更小,信号获取的能力远远不够,导致微弱信号不能被采集到。

2. 冷 CCD 成像仪器成像芯片本身的单个像素尺寸太小,边长一般在 3-6um 之间,像素太小导致芯片本身储存信号的能力太小,导致信号极易过度曝光,无法准确定量。

3. 冷 CCD 成像 Western blot 膜离 CCD 距离太远,导致绝大部分的光信号传输过程中直接损失掉了,并未到达 CCD 感光芯片,进一步降低信号采集的能力。

4. 冷 CCD 成像需要前面加一个镜头才能实现成像,镜头内部都有一系列的透镜组,这些透镜组也会将本就非常微弱的化学发光信号阻挡掉一大半。

5. 冷 CCD 成像所需成像时间太长,CCD 本身的噪音随着时间的延长会随之积累,弱信号会被这些噪音所掩盖掉以至于不能成像。
技术的瓶颈限制了冷 CCD 成像技术的发展,也间接影响科研的发展。工欲善其事必先利其器,必须要有更先进的技术才能突破现有方法的瓶颈,进而更好的为科研服务。
科学进步的历史进程中,仪器公司扮演了极其重要的角色,科学家开发出新的技术,仪器公司利用这些技术开发出新的工具来服务更多的科学家,循环往复,持续进步。
Western 成像领域同样是这样,eBlot拥有科学家团队和创新经验丰富的仪器团队,技术和创新的思想碰撞出了一个 Western 成像领域的革命性突破—eBlot 接触式成像技术。这项革命性创新的技术克服了现有技术在成像灵敏度、定量范围、成像速度和仪器体积大等诸多瓶颈,实现了 Western 成像技术新的飞跃,帮助科学家在新的科形势下的研竞争中取得先机。

eBlot 接触式成像技术主要突破点如下:

1,Western 膜直接贴在感光芯片上进行成像,所有信号均被采集,没有任何光损失,飞跃的提高了成像的灵敏度。

 

2,成像芯片的面积是现有成像技术芯片面积的 137 倍,超大的感光芯片具有超高的信号采集能力,让极其微弱的信号都无处可藏。

3,单个像素尺寸是现有成像技术单个像素尺寸面积的 493 倍,巨大的像素可以将定量范围提升两个数量级,实现对样品的定量。

4,新的成像技术不再依赖于镜头进行成像,消除了镜头透镜组造成的光信号损失。

5,新的成像技术可以将仪器体积压缩到小于现有成像仪器体积的 1/10,大大节省实验室空间。


生命科学领域发展越来越快,科研也进入到范围的高度竞争状态,科研人员要跟同行的科学家竞争,这种新形势下的竞争对于先进工具的依赖越来越高。eBlot化学发光成像仪,帮助中国的科学家在新形势下的激烈竞争中胜出。

eBlot 在北京大学等各个实验室
 


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